سامانه مدیریت نشریات علمی دانشگاه علوم پزشکی مشهد

احمدزاده, شکوفه, بیات, منصور, امینی, کیومرث. (1400). بررسی مولکولی ژن های مقاومت تتراسایکلین در باکتری شیگلا سونئی جدا شده از نمونه بالینی و اثر عصاره علف چشمه (Nasturtium officinal) بر بیان ژن مقاومت به روش Real time- PCR. , 64(1), 2340-2352. doi: 10.22038/mjms.2021.19251
شکوفه احمدزاده; منصور بیات; کیومرث امینی. "بررسی مولکولی ژن های مقاومت تتراسایکلین در باکتری شیگلا سونئی جدا شده از نمونه بالینی و اثر عصاره علف چشمه (Nasturtium officinal) بر بیان ژن مقاومت به روش Real time- PCR". , 64, 1, 1400, 2340-2352. doi: 10.22038/mjms.2021.19251
احمدزاده, شکوفه, بیات, منصور, امینی, کیومرث. (1400). 'بررسی مولکولی ژن های مقاومت تتراسایکلین در باکتری شیگلا سونئی جدا شده از نمونه بالینی و اثر عصاره علف چشمه (Nasturtium officinal) بر بیان ژن مقاومت به روش Real time- PCR', , 64(1), pp. 2340-2352. doi: 10.22038/mjms.2021.19251
احمدزاده, شکوفه, بیات, منصور, امینی, کیومرث. بررسی مولکولی ژن های مقاومت تتراسایکلین در باکتری شیگلا سونئی جدا شده از نمونه بالینی و اثر عصاره علف چشمه (Nasturtium officinal) بر بیان ژن مقاومت به روش Real time- PCR. , 1400; 64(1): 2340-2352. doi: 10.22038/mjms.2021.19251

بررسی مولکولی ژن های مقاومت تتراسایکلین در باکتری شیگلا سونئی جدا شده از نمونه بالینی و اثر عصاره علف چشمه (Nasturtium officinal) بر بیان ژن مقاومت به روش Real time- PCR

مجله دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی مشهد
مقاله 9، دوره 64، شماره 1، فروردین و اردیبهشت 1400، صفحه 2340-2352    اصل مقاله (1.13 M)
نوع مقاله: مقاله پژوهشی
شناسه دیجیتال (DOI): 10.22038/mjms.2021.19251
نویسندگان
شکوفه احمدزاده1؛ منصور بیات* 2؛ کیومرث امینی3
1کارشناس ارشد میکروبیولوژی، گروه بیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران مرکزی، تهران، ایران
2استاد گروه پاتوبیولوژی، دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی،دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات، تهران،ایران
3دانشیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران
چکیده
مقدمه: شیگلا (Shigella) باسـیل گـرم منفـی روده ای کـه عفونـتهـای ناشـی از آن مـشکلات جـدی را در کـشورهای پیشرفته و در حال توسعه ایجاد کرده اسـت. شیوع عفونـتهـای ناشـی از شـیگلا بـه دلیـل دوز پـایین بیماریزایی این باکتری و همچنین انتقال آسان آن از فـردی بـه فرد دیگر و نیز آلوده شدن غیرمستقیم افـراد از طریـق مـصرف مواد غذایی و آب آلوده بسیار آسان است.  جداسازی شیگلا سونئی از مدفوع کودکان, تاثیر و جداسازی عصاره گیاه علف چشمه, جدا سازی مولکولی ژن های تتراسایکلین با روش مالتی پلکس PCR و  تاثیر عصاره بر بیان ژن مقاومت تتراسایکلین باروش مالتی پلکس PCR است.
روش کار: از تعداد 60 سوش شیگلا سونئی جدا شده از کودکان مبتلا به اسهال پس از ایزولاسیون سویه ها بر روی محیط های افتراقی و محیط  کشت (MAC) MacConkey Agar از نظر شکل و رنگ کلنی ها بررسی و ثبت شد. ابتدا DNA ی هر یک از نمونه­ ها توسط کیت استخراج DNA استخراج شد و پس از استخراج نسبت به تکثیر DNA الگو به روش PCR اقدام ­شد. برای بررسی اثر مقاومت آنتی بیوتیکی گیاه علف چشمه نسبت به ژن استخراج شده مقاوم به داروی تتراسایکلین، MIC عصاره گیاه بر روی غلظت های مختلف باکتری شیگلا سونئی بررسی شد. از سویه هایی که واجد ژن های مقاوم به تتراسیکلین می باشند با در نظر گرفتن  MIC، با استفاده دو گروه تیمار و غیر تیمار، پس از انکوباسیون 18 ساعته stationary lag log با استفاده از کیت استخراج RNA x plus استخراج RNA انجام شد. سپس با استفاده از دستگاه RT-PCR ABI plus  میزان بیان ژنtet A  و tet B در دو گروه تیمار و غیرتیمار تحت تاثیر عصاره گیاه علف چشمه بصورت کمی (عددی) CT خوانده شد و بیان ژن تحت تاثیر تیمار، تفسیر گردید.
نتایج: نتایج ایزوله شیگلا سونئی درصد بالایی از بیشترین مقاومت به استرپتومایسین، نالیدیکسیک اسید، تتراسایکلین و آمپی سیلین و کلرامفنیکل با 100%، 100%، 7/86% و 8/91% % و 50 % مشاهده شد. هم چنین بیشترین حساسیت به جنتامایسین و سیپروفلوکساسین با 85% و 6/86% مشاهده شد. نتایج PCR چند گانه نشان داد که، از تمامی 60 ایزوله شیگلا سونئی ، 3 ایزوله فقط دارای ژن tetB (5%)، 55 ایزوله دارای ژن tetA (6/91%)، بودند. نتایج حاصل از آزمون فیشر حاکی از آنست که در سطح خطای 5 درصد ارتباط معناداری بین ژنهای tetA و مقاومت به آنتی­بیوتیک­ها وجود داشته است(05/0p-value <).  نتایج حاکی از آن بود که در سطح خطای 5 درصد ارتباط معناداری بین ژنهای tetB با مقاومت به آنتی­بیوتیک­ها وجود نداشته است(05/0p-value =). نتایج حاکی از آن بود که در سطح خطای 5 درصد ارتباط معناداری بین ژنهای مثبت و منفی کلیه ژنها با مقاومت به آنتی­بیوتیک­ها وجود نداشته است(05/0p-value <).
نتیجه گیری: در نتیجه آنکه مقاومت چندگانه در ایزوله های شیگلا به اکثر آنتی بیوتیک ها از جمله تتراسایکلین، کرامفنیکل، آمپی سیلین، کوتریموکسازول، نالیدیکسیک اسید و فلوروکینولون ها و هم چنین سفالوسپورین های نسل سوم در نقاط مختلف جهان رو به افزایش است. پارامتر Fold change نیز بیانگر میزان Fold change   گروه تیمار نشده نسبت به گروه تیمار شده می باشد. میزان Fold Change برای ژن tetA برابر 21/1- که نشان می دهد این ژن در گروه تیمار شده با عصاره گیاه علف چشمه نسبت به گروه غیر تیمار شده 21/1برابر کاهش یافته است.
کلیدواژه‌ها
درمان پاسخ محور؛ درمان ذهن خوانی؛ مهارت اجتماعی؛ اوتیسم
مراجع
  1. Rrahman F, Klementina P, Qenan M, Beqe H, Kemajl B. ANALYSES OF microbiological data indicates from
    physic-chemcal parameters, in fish species from sitnica, lepenci and lumbardhi i prizrenit rivers (kosova).
    international journal of ecosystems and ecology science-ijees. 2015;5(2):207-12.
  2. 2. Hallaç B. determination of prevalence and incidence of Salmonella spp. and Shigella spp. in some foods in
    iraq/sulaymaniyah/qaladze: Siirt Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü; 2017.
    3. Jones CH, Tuckman M, Murphy E, Bradford PA. Identification and sequence of a tet (M) tetracycline resistance
    determinant homologue in clinical isolates of Escherichia coli. Journal of bacteriology. 2006;188(20):7151-64.
    4. Low DE. Nonpneumococcal streptococcal infections, rheumatic fever. Goldman's Cecil Medicine: Elsevier;
    2012. p. 1823-9.
    5. Ramos JL, Martínez-Bueno M, Molina-Henares AJ, Terán W, Watanabe K, Zhang X, et al. The TetR family of
    transcriptional repressors. Microbiology and molecular biology reviews. 2005;69(2):326-5.6
    6. Allard J, Bertrand K. Membrane topology of the pBR322 tetracycline resistance protein. TetA-PhoA gene fusions
    and implications for the mechanism of TetA membrane insertion. Journal of Biological Chemistry.
    1992;267(25):17809-19.
    7. Sapunaric FM, Levy SB. Substitutions in the interdomain loop of the Tn10 TetA efflux transporter alter
    tetracycline resistance and substrate specificity. Microbiology. 2005;151(7):2315-22.
    8. Parsaei P, Bahmani M, Naghdi N, Asadi-Samani M, Rafieian-Kopaei M, Sepehri-Boroujeni M. Shigellosis
    phytotherapy: A review of the most important native medicinal plants in Iran effective on Shigella. Der Pharmacia
    Lettre. 2016;8(2):249-55.
    9. Davidson A. The Oxford companion to food: OUP Oxford; 2014.
    10. Onyimonyi A, Olabode A, Okeke G. Performance and economic characteristics of broilers fed varying dietary
    levels of neem leaf meal (Azadirachta indica). International Journal of Poultry Science. 2009;8(3):256-9.
    11. Nair MP, Kandaswami C, Mahajan S, Chadha KC, Chawda R, Nair H, et al. The flavonoid, quercetin,
    differentially regulates Th-1 (IFNγ) and Th-2 (IL4) cytokine gene expression by normal peripheral blood
    mononuclear cells. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Cell Research. 2002;1593(1):29-36.
    12. Fennell J. Potential for watercress production in Australia. Rural Industries Research and Development
    Corporation, Kingston ACT, Australia. 2006.
    13. KASAI K. Amplification of a variable number of tandem repeats (VNTR) locus variable number of tandem
    repeats (VNTR) locus( pMCT 118) by polymerase chain reaction (PCR) and its amplification. J Forens Sci.
    1990;35:1196-200.
    14. Dolatshahi Z, Amini K. Survey of tetracycline resistance genes in Shigella sonnei isolated from acute pediatric
    with bacterial diarrhea using Multiplex PCR method and their antibiotic resistance patterns. Zanko journal of
    Medical sciences. 2016;17(52):35-44.
    15. Sayers EW, Barrett T, Benson DA, Bolton E, Bryant SH, Canese K, et al. Database resources of the national
    center for biotechnology information .Nucleic acids research. 2012;40(D1):D13-D25.
    16. Ardavan A, Rival O, Morton JJ, Blundell SJ, Tyryshkin AM, Timco GA, et al. Will spin-relaxation times in
    molecular magnets permit quantum information processing? Physical review letters. 2007;98(5):057201.
    17. Croy R. Molecular Genetics II-Genetic Engineering Course (Supplementary notes). Durham University durham ac
    uk. 1998.
    18. Asadi M, Mirvaghefei A, Nematollahi M, Banaee M, Ahmadi K. Effects of Watercress (Nasturtium nasturtium)
    extract on selected immunological parameters of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Open Veterinary Journal.
    2012;2(1):32-9.
    19. Hartman AB, Essiet II, Isenbarger DW, Lindler LE. Epidemiology of tetracycline resistance determinants in
    Shigella spp. and enteroinvasive Escherichia coli: characterization and dissemination of tet (A)-1. Journal of
    Clinical Microbiology. 2003;41(3):1023-32.
  3. 20. Penatti M, Hollanda L, Nakazato G, Campos T, Lancellotti M, Angellini M, et al. Epidemiological
    characterization of resistance and PCR typing of Shigella flexneri and Shigella sonnei strains isolated from
    bacillary dysentery cases in Southeast Brazil. Brazilian Journal of Medical and Biological Research.
    2007;40(2):249-58.
    21. Davies JR, Farrant W, Tomlinson A. Further studies on the antibiotic resistance of Shigella sonnei: I. Transferable
    antibiotic resistance. Epidemiology & Infection. 1968;66(3):471-7.
    22. Shahsavan S, Owlia P, Lari AR, Bakhshi B, Nobakht M. Investigation of efflux-mediated tetracycline resistance
    in Shigella isolates using the inhibitor and real time polymerase chain reaction method. Iranian journal of
    pathology. 2017;12(1):53.
    23. Pons MJ, de la Peña AT, Mensa L, Martón P, Ruiz-Roldán L, Martínez-Puchol S, et al. Differences in tetracycline
    resistance determinant carriage among Shigella flexneri and Shigella sonnei are not related to different plasmid
    Inc-type carriage. Journal of global antimicrobial resistance. 2018;13:131-4.
آمار
تعداد مشاهده مقاله: 953
تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 719